Search for content and authors
 

Zastosowanie układów mikroprzepływowych w izolacji  nasienia

Ewa Pastuszek 1Mirosław Sawczak 2Patrycja M. Kulwikowska 1Krzysztof Łukaszuk 1,3

1. Gdański Uniwersytet Medyczny, M. Skłodowskiej-Curie 3a 3, Gdańsk 80-210, Poland
2. Instytut Maszyn Przepływowych PAN, Fiszera 14, Gdańsk 80-231, Poland
3. INVICTA, Trzy Lipy 3, Gdańsk 80-172, Poland

Abstract

Preparatyka nasienia jest ważnym elementem technik wspomaganego rozrodu (ang. assisted reproductive technology, ART). Izolacja plemników z nasienia ma na celu oddzielenie plemników od plazmy nasienia, usunięcie substancji hamujących zdolność do zapłodnienia, zapoczątkowanie procesów kapacytacji ułatwiających zapłodnienie komórki jajowej oraz selekcję najbardziej prawidłowych plemników na podstawie uznanych parametrów – na przykład prawidłowej morfologii i ruchliwości.

Pomimo znacznego wzrostu zainteresowania tymi technikami, obecnie stosowana metodologia tego procesu pozostaje niezmienna. Obecnie do izolacji plemników najczęściej stosuje się  separację na nieciągłym gradiencie podłoża bądź migrację wstępującą  (ang. swim up). Metody te jednak nie mogą być zastosowane w przypadkach próbek o bardzo małej koncentracji plemników . Niektóre badania sugerują również, że techniki te  mogą uszkodzić DNA także poprzez produkcję wolnych rodników tlenowych. Ponadto są one praco i/lub czasochłonne. Idealna technika izolacja plemników powinna być zatem  szybka, prosta i atraumatyczna, dając jednocześnie dobre wyniki bez względu na ilość i jakość pierwotnej próbki nasienia. Poprawa jakości technik separacyjnych i izolacyjnych powinna zwiększyć skuteczność ART.

Coraz wyraźniej widoczne są zatem tendencje zmierzające do poprawy jakości technik separacyjnych np. poprzez  zastosowanie układów mikroprzepływowych. Układy tego typu testowane w naszych badaniach stworzone zostały z zastosowaniem metody fotolitografii. Składają się one z płaskiego szklanego podłoża, które za pomocą plazmy tlenowej połączone zostało z  płytką  poli(dimetylosiloksanową) (PDMS) zawierającą system rozgałęzionych mikrokanałów. W mikrokanałach przepływ cieczy jest laminarny skutkując mieszaniem się płynów ze strumieni tylko na zasadzie dyfuzji. Dodatkową zaletą tego układu jest to, że przepływ spowodowany jest siłą grawitacji, co eliminuje konieczność stosowania różnego rodzaju pomp i tłoków.

Prowadzone są badania nad skutecznością systemu umożliwiającego separację ruchliwych i morfologicznie prawidłowych plemników z nasienia nawet w próbkach o bardzo słabych parametrach jakościowych. W przypadku pozytywnych wyników badań testowych, prezentowana metoda separacji może być doskonałą alternatywą  dla tradycyjnie stosowanych metod separacji nasienia.

Literatura:

Ronald S.Suh, Nandita Phadke, Dana A.Ohl, Shuichi Takayama, Gary D.Smith, Rethinking gamete/embryo isolation and culture with microfluidics, Human Reproduction Update, Vol.9, No.5 pp. 451-461, 2003

G.D. SmithS. Takayama, Gamete and embryo isolation and culture with microfluidics, Theriogenology, 68S S190–S195, 2007

 

Legal notice
  • Legal notice:
 

Presentation: Poster at Nano-Biotechnologia PL, by Ewa Pastuszek
See On-line Journal of Nano-Biotechnologia PL

Submitted: 2012-08-24 14:22
Revised:   2012-08-24 14:25